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DEM109-500T
500T
￥510.00
產品描述
產品簡介
BCA 蛋白定量檢測試劑盒，是一種靈敏并且抗干擾能力強的蛋白定量檢測試劑盒。蛋白質在堿性條件下能夠將 Cu2+還原為 Cu+，BCA (Bicinchoninic acid)與 Cu+螯合形成紫藍色螯合物，通過測定螯合產物在562nm 的吸光度值，即可對蛋白濃度進行定量。
BCA 蛋白定量方法對去垢劑耐受能力強，SDS, Triton X-100, Tween-20 等去垢劑，只要濃度低于 5%，即對蛋白濃度測定無明顯影響。特別適合用于 RIPA 裂解液提取的細胞和組織蛋白樣品中的蛋白濃度測定。
本試劑盒方便快捷，加入待測樣品 1 小時即可進行吸光度測定，對蛋白定量線性范圍在 31.2-1000μg/ml之間，靈敏度≤31.2μg/ml。
試劑盒組成
需要而未提供的試劑及器材
1. 超純水
2. 細胞培養用 PBS 或 RIPA 裂解液
3. 系列可調節量程移液器及吸頭
4. 干凈的試管、離心管及 96 孔板
5. 酶標儀
儲存條件
蛋白標準品置于-20℃儲存，其它部分 4℃儲存，保質期 12 個月。
注意事項
本試劑盒涉及氧化還原反應，很多氧化劑和還原劑都會干擾試劑盒的測定，特別是帶巰基的試劑會干擾本試劑盒的測定，請盡量避免使用。
本試劑盒涉及金屬離子的螯合反應，避免使用 EDTA 等螯合劑處理樣品，如果使用，請保持濃度≤0.5 mM。
每次測定時利用標準品制作標準曲線。
初次使用試劑盒時，小體積液體試劑請適當離心后使用。
本產品僅限專業人員用于科學研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明
1. 樣品的準備
1.1 細胞樣品的準備：收集適量新鮮細胞，PBS 洗滌細胞一次，離心收集細胞，吸盡上清。加入 400 μl 冰冷 PBS 勻漿裂解或利用中等強 度 RIPA 裂解液冰浴裂解。4℃，10000g 離心 10 分鐘。取上清用于蛋白濃度測定。不立即測定的樣品可以-20℃及其以下溫度保存。
1.2 組織樣品的準備：取約 20 mg 組織，加入 1 ml 的冰冷 PBS 或中等強度 RIPA 裂解液，用勻漿器冰浴勻漿。 4℃，10000g 離心 10 分鐘。取上清用于蛋白濃度測定。不立即測定的樣品可以-20℃及其以下溫度保存。如果樣品中蛋白濃度超出測定范圍，可利用 PBS 或 RIPA 裂解液適當稀釋后測定，稀釋倍數請通過預實驗確定。
1.3 血清、血漿、唾液或尿液樣品的準備：血清、血漿、唾液或尿液樣品，都可以利用純水適當稀釋后直接用于測定。不立即測定的樣品可 以-20℃及其以下溫度保存。
2. 試劑盒的準備
BCA 蛋白定量檢測工作液的配制：按下表比例取 BCA 溶液和 Cu2+溶液配制 BCA 蛋白定量檢測工作液。
3. 標準品的準備
利用制備樣品的溶劑（PBS 或 RIPA 裂解液等）將部分 10 mg/ml 蛋白標準品稀釋到 1000μg/ml，然后再倍倍稀釋成 500、250、125、62.5、31.2 μg/ml 等濃度梯度，用于標準曲線測定。每次測定前重新配置標準品系列稀釋液。
測定方法
參考下表，使用 96 孔板，依次加入 BCA 蛋白定量檢測工作液、標準品或樣品后，混勻，37℃孵育 1小時。
注：如果將孵育溫度提高到 60℃，可以縮短反應時間。
2. 孵育結束后，利用酶標儀測定 A562nm。如果樣品吸光度超過最高濃度標準品吸光度值，可適當稀釋樣品后測定，如果樣品吸光度過低，可適當冷凍干燥濃縮樣品后測定。
數據處理
利用標準品濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標制作 BCA 蛋白濃度檢測標準曲線，并獲得橫縱坐標之間的函數關系式，然后利用標曲和各樣品的吸光度值計算樣品中蛋白濃度。 蛋白濃度標曲如下圖所示：
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