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產品簡介：

? Cell Counting Kit 簡稱 CCK 試劑盒， 為 MTT 法的替代方法， 是一種基于 WST(水溶性四唑鹽，化學名： 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
? WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物， 在電子耦合試劑存在的情況下， 可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖 1)。 細胞增殖越多越快， 則顏色越深； 細胞毒性越大， 則顏色越淺。 對于同樣的細胞， 顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

CCK 法與 MTT 法之間的比較：

保存條件：
4oC 避光保存一年有效， -20oC 避光保存兩年有效。

注意事項:
? 由于使用 96 孔板進行檢測， 如果細胞培養時間較長， 一定要注意蒸發問題。 一方面， 由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發， 可以采取棄用周圍一圈的辦法， 改加相同量的 PBS、 水或培養液； 另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養箱內水源的地方， 以緩解蒸發。
? 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應， 所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測， 如果待檢
測體系中存在較多的還原劑， 需設法去除。
? 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡， 否則會干擾測定。
? 本產品僅限于專業人員的科學研究用， 不得用于臨床診斷或治療， 不得用于食品或藥品， 不得存放于普通住宅內。
? 為了您的安全和健康， 請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1、 通常在 96 孔板中， 細胞增殖實驗和細胞毒性實驗分別接種細胞懸液(5000 個細胞和 2000 個細胞/100μL/孔， 具體每孔所用的細胞的數目， 需根據細胞的大小、 細胞增殖速度的快慢等因素決定)。 設置加了相應量細胞培養液、 藥物和 CCK-8 溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
2、 細胞貼壁 24 小時后， 按照實驗需要， 進行培養并給予 0-10 微升特定的藥物刺激。
3、 藥物處理 2~4 天， 然后每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡， 它們會影響 OD 值的讀數)。
4、 將培養板在培養箱內孵育 1~4 小時， 然后用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/vSDS 溶液， 并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。 在 24 小時內吸光度不會發生變化。
6、 培養基中酚紅的吸光度可以在計算時， 通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去， 因此不會對檢測造成影響。

活力計算：
細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0 加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥)： 具有細胞、 CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白)： 具有培養基和 CCK 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0 加藥)： 具有細胞、 CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力： 細胞增殖活力或細胞毒性活力