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貨號：DE5012
規格：裂解液100ml，PMSF 1.5ml
          本產品配有 PMSF（100mM）
保存：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF -20℃保存。
產品簡介：RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。
使用說明
     如發現 RIPA 有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM，混勻備用（PMSF 現用現加）。
1、樣品前處理：
a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 5-10×105細胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Westernblotting 和免疫沉淀等操作。
注意事項
1、 使用本裂解液可以裂解細胞核，釋放出核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度。
2、 本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA 法或者 Lowry 法檢測蛋白濃度。
3、 如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。
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